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alpco常見問題與解答

問：我購買的試劑盒可以使用什么樣的樣品類型？

A.每種類型的試劑盒都經(jīng)過了方案中所示樣品類型的驗(yàn)證。所有其他樣本類型都必須經(jīng)過內(nèi)部驗(yàn)證。請(qǐng)聯(lián)系ALPCO的產(chǎn)品支持團(tuán)隊(duì)，了解產(chǎn)品用戶可能進(jìn)行的其他樣本類型測(cè)試的更多信息。

問：該試劑盒是否與其他物種交叉反應(yīng)？

A.每種試劑盒均已針對(duì)方案中所示的物種進(jìn)行了驗(yàn)證。盡管可能存在交叉反應(yīng)性，但需要在內(nèi)部對(duì)其他物種進(jìn)行驗(yàn)證。請(qǐng)聯(lián)系ALPCO的產(chǎn)品支持團(tuán)隊(duì)，了解產(chǎn)品用戶可能進(jìn)行的物種驗(yàn)證的更多信息。

問：我運(yùn)行了多少標(biāo)準(zhǔn)和控制？

A.每個(gè)試劑盒至少包括一套標(biāo)準(zhǔn)品（或一小瓶待稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品），在大多數(shù)情況下包括一個(gè)或兩個(gè)對(duì)照品。每次進(jìn)行分析時(shí)，必須運(yùn)行標(biāo)準(zhǔn)品和對(duì)照品（如果包括），強(qiáng)烈建議運(yùn)行所有標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品/和樣品一式兩份。

問：我可以使用其他試劑盒或批次的試劑嗎？

答：沒有。不要用其他套件或批次的部件替代。

問：我可以修改培養(yǎng)時(shí)間或溫度嗎？

答：沒有。請(qǐng)不要偏離協(xié)議。

問：我可以使用過期的工具包嗎？

答：沒有。如果試劑盒超過了試劑盒標(biāo)簽上規(guī)定的有效期，則不應(yīng)使用該試劑盒。

問：我可以使用放置在室溫下的試劑盒嗎？

A.請(qǐng)確保試劑盒及其組件按照試劑盒插頁中的指示存放。有關(guān)試劑盒在室溫下穩(wěn)定性的更多信息，請(qǐng)聯(lián)系ALPCO的產(chǎn)品支持團(tuán)隊(duì)。

問：我可以跳過在化驗(yàn)中運(yùn)行對(duì)照嗎？

答：否。如果提供了對(duì)照品，請(qǐng)務(wù)必在每次分析中運(yùn)行對(duì)照品。對(duì)照品的濃度應(yīng)在分析證書規(guī)定的范圍內(nèi)。

問：我可以用多通道移液管清洗盤子嗎？

答：我們不建議使用多通道移液管。必須用足夠且相等的力分配沖洗緩沖液，以正確沖洗井。我們建議使用Statmatic清洗噴嘴tricontinent或自動(dòng)洗板機(jī)。請(qǐng)參閱網(wǎng)站“資源"部分的“學(xué)習(xí)中心"選項(xiàng)卡，獲取顯示正確洗滌技術(shù)的視頻，或單擊此處。

問：有必要對(duì)我的樣品進(jìn)行布局嗎？

答：非常重要的是，要知道你的標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照品和樣品在板上的位置，以便正確生成結(jié)果。單擊此處獲取可下載的圖版。這也有助于在潷析過程中，在板條松動(dòng)的情況下，在板上標(biāo)記板條（在兩端使用小標(biāo)簽）。

問：為什么洗滌步驟如此重要？

A.正確清洗平板是運(yùn)行任何成功ELISA的一個(gè)非常關(guān)鍵和重要的方面。洗盤子時(shí)要保持一致。過快或過慢地清洗平板、不全清洗或抽吸以及讓孔保持干燥都是影響測(cè)定精度的因素。我們不建議為此目的使用多通道移液管。多通道移液管沒有施加足夠的壓力來底去除未結(jié)合的材料，這將導(dǎo)致更高的背景噪聲。網(wǎng)站的學(xué)習(xí)中心部分提供了顯示正確洗滌技術(shù)的視頻，或單擊此處。

問：我可以冷凍和解凍我的樣品多少次？

A.建議的冷凍/解凍周期因套件而異。我們建議避免重復(fù)冷凍和解凍循環(huán)，除非手冊(cè)中另有說明。如果采集的樣本量允許，準(zhǔn)備并冷凍等分試樣，以消除或減少冷凍/解凍循環(huán)。

問：我可以使用自己的“自制"緩沖器嗎？

A.每個(gè)試劑盒都含有稀釋劑和緩沖液，其配方與特定的樣品類型緊密匹配。如果使用未隨試劑盒提供的組件進(jìn)行檢測(cè)，制造商將不保證試劑盒的性能。

問：如果稀釋劑用完了怎么辦？

A.提供足夠的試劑，以在遵循方案時(shí)運(yùn)行整個(gè)試劑盒。如果您的研究類型需要更高的稀釋度，請(qǐng)?jiān)谠O(shè)置分析之前計(jì)算所需的稀釋劑量，并且可以購買額外的稀釋劑。請(qǐng)聯(lián)系客戶支持以獲取有關(guān)單個(gè)組件可用性的信息。

問：我的控制裝置超出范圍。我的數(shù)據(jù)是否無效？

A.對(duì)照品的濃度必須在分析證書規(guī)定的范圍內(nèi)。如果對(duì)照超出范圍，化驗(yàn)可能無效。此外，確保已使用協(xié)議中建議的曲線擬合。如果提供了多個(gè)建議，則使用適合標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)點(diǎn)的回歸方法。

問：我的標(biāo)準(zhǔn)曲線沒有得到很好的值。我可以使用協(xié)議中的示例值嗎？

答：沒有。切勿使用示例值來計(jì)算化驗(yàn)結(jié)果。應(yīng)根據(jù)每次測(cè)定獲得的標(biāo)準(zhǔn)值/校準(zhǔn)值生成樣品濃度。

問：我的樣本產(chǎn)生的OD值超出標(biāo)準(zhǔn)范圍。我還能計(jì)算濃度嗎？

A.只能使用標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)的樣本值。超出此范圍的值通常不是線性的，可能導(dǎo)致錯(cuò)誤的推斷結(jié)果。

問：我的標(biāo)準(zhǔn)曲線很好，但我的樣本沒有得到信號(hào)。為什么？

A.樣品可能含有分析物，但基于試劑盒的靈敏度，無法檢測(cè)。樣本的矩陣也可以掩蓋檢測(cè)。確保按照方案中的規(guī)定進(jìn)行稀釋，并審查程序，以確保所有試劑的添加量和順序正確。

問：我可以運(yùn)行多少個(gè)樣本？

A.ALPCO現(xiàn)在提供了一個(gè)工具來幫助計(jì)算一個(gè)套件中可以運(yùn)行的樣本數(shù)量。一旦您審查了協(xié)議以確定您計(jì)劃運(yùn)行的特定試劑盒可能需要的標(biāo)準(zhǔn)品、控件和空白品的數(shù)量，請(qǐng)單擊此處進(jìn)入樣本計(jì)算器。

Q.什么是參考波長(zhǎng)？

A.參考波長(zhǎng)是用于校正（標(biāo)準(zhǔn)化）主波長(zhǎng)OD值的次級(jí)波長(zhǎng)。這有助于解釋鋼板中的缺陷。

問：為什么450nm是常用的測(cè)量波長(zhǎng)？

A.測(cè)量波長(zhǎng)由每個(gè)試劑盒中使用的基質(zhì)確定。最常見的是TMB。它產(chǎn)生一種在650nm波長(zhǎng)下可測(cè)量的藍(lán)色。它可以通過停止與1M磷酸或1M硫酸的反應(yīng)而用于終點(diǎn)測(cè)定。酸化時(shí)形成黃色反應(yīng)產(chǎn)物，其在450nm下可測(cè)量。

Q.測(cè)量波長(zhǎng)和參考波長(zhǎng)之間的區(qū)別是什么？

A.測(cè)量波長(zhǎng)和參考波長(zhǎng)之間的主要區(qū)別在于，第一個(gè)波長(zhǎng)用于讀取基板產(chǎn)生的吸光度，第二個(gè)波長(zhǎng)（參考波長(zhǎng)）用于檢測(cè)板中的缺陷。

問：我可以在沒有參考波長(zhǎng)的情況下讀取該板嗎？

答：是的，你可以。然而，使用參考波長(zhǎng)可以提高測(cè)定的靈敏度。

ELISA故障排除指南

查看完整的ELISA故障排除指南

鋼板清洗不足

對(duì)于自動(dòng)清洗機(jī)：檢查噴嘴是否堵塞，驗(yàn)證分配量，并定期清潔以防止和清除任何堆積物。有關(guān)更多維護(hù)信息，請(qǐng)參閱用戶手冊(cè)。

對(duì)于手動(dòng)沖洗：確保所有井都用沖洗緩沖液強(qiáng)制過滿。避免使用多通道移液管進(jìn)行清洗?？紤]從清洗瓶切換到手持式歧管或自動(dòng)洗板機(jī)，特別是在進(jìn)行化學(xué)發(fā)光分析時(shí)。這里提供了顯示正確洗滌技術(shù)的視頻。

不要跳過清洗或浸泡步驟。

添加綴合物或基質(zhì)期間多通道移液管出現(xiàn)問題

檢查多通道移液管校準(zhǔn)。確保所有端固定牢固，每次更換端時(shí)，吸取相同體積的液體。觀察氣泡并考慮反向吸移技術(shù)，以確保氣泡不會(huì)干擾吸移精度。參見正向和反向移液視頻。

移液技術(shù)

檢查單吸管校準(zhǔn)。觀察氣泡并考慮反向吸移技術(shù)，以確保氣泡不會(huì)干擾吸移精度。參見正向和反向移液視頻。

井內(nèi)氣泡

確保在每個(gè)清洗步驟后用力敲打板，使其干燥，以盡量減少孔中殘留的清洗緩沖液。加入分析試劑（尤其是基質(zhì)）后殘留在孔中的氣泡應(yīng)在平板培養(yǎng)和平板讀數(shù)之前去除?？梢允褂酶蓛舻囊埔汗芏藖砣コ龤馀荨?/span>

僅樣本的重復(fù)之間精度差（高CV值）

樣品混合不足

在移液之前對(duì)每個(gè)樣品進(jìn)行渦流，以確保樣品均勻。

移液技術(shù)

在將第一個(gè)樣本復(fù)制品轉(zhuǎn)移到平板之前，將樣本從端吸入和取出兩次，以覆蓋端內(nèi)部。在轉(zhuǎn)移樣品時(shí)，確保沒有樣品液滴粘附在端的外部。如果容量允許，考慮采用反向吸移技術(shù)，以確保氣泡不會(huì)干擾吸移精度。參見正向和反向移液視頻。

鋼板清洗不足

對(duì)于自動(dòng)清洗機(jī)：檢查噴嘴是否堵塞，驗(yàn)證分配量，并定期清潔以防止和清除任何堆積物。有關(guān)更多維護(hù)信息，請(qǐng)參閱用戶手冊(cè)。

對(duì)于手動(dòng)沖洗：確保所有井都用沖洗緩沖液強(qiáng)制過滿。避免使用多通道移液管進(jìn)行清洗?？紤]從清洗瓶切換到手持式歧管或自動(dòng)洗板機(jī)，特別是在進(jìn)行化學(xué)發(fā)光分析時(shí)。這里提供了顯示正確洗滌技術(shù)的視頻。

不要跳過清洗或浸泡步驟。

高樣本和低樣本的結(jié)轉(zhuǎn)

確保每個(gè)樣本之間的端都發(fā)生了變化。每次孵育時(shí)使用新的平板密封劑。

樣品稀釋緩沖液錯(cuò)誤

如果樣品需要稀釋，確認(rèn)使用了適當(dāng)?shù)南♂尵彌_液。

標(biāo)準(zhǔn)曲線不佳（與之前的結(jié)果或分析證書不匹配）

鋼板清洗不足

對(duì)于自動(dòng)清洗機(jī)：檢查噴嘴是否堵塞，驗(yàn)證分配量，并定期清潔以防止和清除任何堆積物。有關(guān)更多維護(hù)信息，請(qǐng)參閱用戶手冊(cè)。

對(duì)于手動(dòng)沖洗：確保所有井都用沖洗緩沖液強(qiáng)制過滿。避免使用多通道移液管進(jìn)行清洗?？紤]從清洗瓶切換到手持式歧管或自動(dòng)洗板機(jī)，特別是在進(jìn)行化學(xué)發(fā)光分析時(shí)。這里提供了顯示正確洗滌技術(shù)的視頻。

不要跳過清洗或浸泡步驟。

移液技術(shù)

檢查移液管校準(zhǔn)。觀察氣泡并考慮反向吸移技術(shù)，以確保氣泡不會(huì)干擾吸移精度。參見正向和反向移液視頻。

試劑混合不充分

使用前，讓重組試劑放置在手冊(cè)中所示的時(shí)間長(zhǎng)度內(nèi)。使用適當(dāng)?shù)脑O(shè)備（渦流混合器等）確保試劑在使用前是均勻的。如果混合試劑盒試劑以形成“工作"成分，則確認(rèn)使用了正確的體積和稀釋劑。

板材晃動(dòng)不足

不正確的搖動(dòng)運(yùn)動(dòng)會(huì)導(dǎo)致混合不足和抗體/分析物相互作用。按照使用說明中建議的速度搖動(dòng)板。建議使用半徑很小的軌道運(yùn)動(dòng)振動(dòng)器。參見示例。

添加到井中的試劑量錯(cuò)誤

檢查剩余體積，以確認(rèn)向孔中添加了正確體積的試劑。

制備試劑的儲(chǔ)存

確保所有試劑正確儲(chǔ)存并在規(guī)定期限內(nèi)使用。對(duì)于化學(xué)發(fā)光測(cè)定，預(yù)先制備魯米諾底物可導(dǎo)致信號(hào)降低。

環(huán)境溫度低或不一致

遵循方案中所示的培養(yǎng)溫度。

化學(xué)發(fā)光儀器的差異

信號(hào)，或相對(duì)光單位（RLU），可以在不同的化學(xué)發(fā)光板讀數(shù)器之間顯著變化。“典型"標(biāo)準(zhǔn)曲線或分析證書中顯示的信號(hào)可能與觀察到的信號(hào)非常不同。

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