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生物結(jié)合試劑 SoluLINK 生物結(jié)合技術(shù)已經(jīng)被設(shè)計(jì)成允許所有類別的生物分子的快速和可量化的結(jié)合。該技術(shù)是基于 HyNic 與4FB 反應(yīng)生成穩(wěn)定的雙芳腙鍵。與其他的共軛化學(xué)不同，這些連接體是發(fā)色的，這意味著它們吸收光線，因此可以很容易地通過(guò)簡(jiǎn)單的光譜儀讀數(shù)進(jìn)行量化。雙芳腙生色團(tuán)對(duì)于測(cè)量每個(gè)生物分子上的接頭數(shù)和兩個(gè)生物分子之間的結(jié)合程度是至關(guān)重要的。可量化的接頭允許倫比的重復(fù)性從批量到批量的生物共軛制備。去除未包含的標(biāo)簽的純化是至關(guān)重要的，因?yàn)樗鼘?dǎo)致減少非特異性結(jié)合，更高的靈敏度和更高的信噪比在您的測(cè)定。盡管它們看起來(lái)很簡(jiǎn)單，但是由于低效的共軛化學(xué)和缺乏純化步驟，相互競(jìng)爭(zhēng)的“混合和使用"共軛產(chǎn)物并不能很好地工作。這使得反應(yīng)混合物中既有未結(jié)合的生物分子(例如抗體) ，也有過(guò)量的標(biāo)記(例如氟、寡核苷酸和酶)。ChromaLINK 物素和辛是唯的試劑，他們的類型，可以直接定量連接到生物分子。這些試劑含有與 SoluLINK 生物結(jié)合技術(shù)相同的雙芳基腙鍵。物素化的生物分子被有效地固定在鏈霉親和素包被的表面，如磁珠和瓊脂糖。NanoLINK 和 MagnaLINK 鏈霉親和素磁珠具有比其他市售產(chǎn)品高15倍的物素結(jié)合能力。鏈霉親和素瓊脂糖超高性能 TM 還具有市場(chǎng)上任何瓊脂糖珠最高的物素結(jié)合能力。SoluLINK 結(jié)合試劑盒包含生產(chǎn)和純化高質(zhì)量結(jié)合所需的一切。共軛連接器和附件也可作為靈活的獨(dú)立產(chǎn)品擴(kuò)大工作。這些接頭是理想的蛋白質(zhì)交聯(lián)，蛋白質(zhì)標(biāo)記，化學(xué)交聯(lián)，蛋白質(zhì)交聯(lián)和抗體綴合。所有 SoluLINK 產(chǎn)品均按照 TriLink ISO9001:2015質(zhì)量體系生產(chǎn)，以確保持續(xù)供應(yīng)高質(zhì)量產(chǎn)品。

抗體-寡核苷酸 All-in-OneTM 結(jié)合試劑盒 A-9202

抗體-寡核苷酸全合一結(jié)合試劑盒使用的 SoluLINK 生物結(jié)合技術(shù)將抗體與寡核苷酸連接起來(lái)。琥珀酰亞胺基 -4-甲酰基苯甲酰胺(S-4FB)修飾的寡核苷酸和琥珀酰亞胺基 -6-肼基酰胺(S-HyNic)修飾的抗體形成抗體-寡核苷酸偶聯(lián)物。該試劑盒專門設(shè)計(jì)用于將100μg 抗體偶聯(lián)到20-80核苷酸范圍內(nèi)的任何氨基修飾的寡核苷酸。主要特點(diǎn): 任何哺乳動(dòng)物單克隆或多克隆 IgG 同種型抗體都可以與寡核苷酸偶聯(lián)，并在總動(dòng)手時(shí)間約4小時(shí)內(nèi)純化。SoluLINK 生物共軛技術(shù)在354nm 處形成穩(wěn)定的、紫外可追蹤的雙芳基腙鍵，其摩爾消光系數(shù)為29,000L mol-1cm-1。由于發(fā)色共軛鍵的形成，共軛反應(yīng)可以用分光光度法定量。抗體標(biāo)記/修飾劑類型寡核苷酸反應(yīng)性胺推薦儲(chǔ)存2 °-8 ° C-不要凍結(jié)應(yīng)用抗體標(biāo)記,s-HyNic (100μg)• Oligo 再懸浮液(1mL)•1X 修飾緩沖液(1.5 mL)•珠洗液緩沖液 A (5mL)•珠洗液緩沖液 A (250μL)•紅帽旋轉(zhuǎn)柱(2)•黃帽旋轉(zhuǎn)柱 A無(wú)水 DMF (1.5毫升)2-肼基吡啶(2-HP)試劑(500μL)親和磁珠(100μL)2毫升收集管(14) S-4FB (1毫克)棕色帽旋轉(zhuǎn)柱 C (2)

抗體寡核苷酸一體化結(jié)合 KitCat。沒有。A-9202-001儲(chǔ)存室2 °-8 ° C ー不要凍結(jié)。抗體-寡核苷酸全合一結(jié)合試劑盒需要100μg 抗體，濃度為1mg/ml?？贵w緩沖液不應(yīng)含有載體蛋白，如 BSA 或明膠，不應(yīng)含有高濃度(> 25%)的甘油。該試劑盒設(shè)計(jì)用于在20-60核苷酸范圍內(nèi)的25 OD260單位的氨基修飾寡核苷酸的最佳執(zhí)行。短于20個(gè)核苷酸的寡核苷酸不能成功地與該試劑盒結(jié)合; 長(zhǎng)于60個(gè)核苷酸的寡核苷酸可以使用，盡管以犧牲結(jié)合產(chǎn)率為代價(jià)。如果需要，可以使用至少15 OD260單位的氨基修飾寡核苷酸?？贵w-寡核苷酸全合一結(jié)合試劑盒包含所有必要的試劑和組分來(lái)產(chǎn)生一個(gè)抗體-寡核苷酸結(jié)合物。基于的 SoluLINK 生物結(jié)合技術(shù)，它允許任何純化的 IgG 同種型哺乳動(dòng)物抗體在三個(gè)階段的過(guò)程中進(jìn)行結(jié)合和純化，這個(gè)過(guò)程大約需要11小時(shí)，只需要2小時(shí)的動(dòng)手時(shí)間。首先用 S-4FB 修飾用戶提供的氨基寡核苷酸，然后用 S-HyNic 修飾用戶提供的抗體。接下來(lái)，兩個(gè)修飾的生物分子在反應(yīng)催化劑存在下混合形成共軛物，隨后使用磁性親和固相進(jìn)行純化。這個(gè)過(guò)程的結(jié)果是20-60μg 的高純度抗體-寡核苷酸偶聯(lián)物是準(zhǔn)備使用(圖1)。產(chǎn)量在很大程度上取決于寡核苷酸的長(zhǎng)度，較短的寡核苷酸通常具有較高的產(chǎn)量。最終的共軛物濃度通常在0.1 -0.3毫克/毫升之間。

抗體-寡核苷酸全合一結(jié)合試劑盒遵循三階段方案，每個(gè)階段需要幾個(gè)小時(shí)才能完成。如果需要，該方案可以分為兩天，第1天進(jìn)行階段1(用 S-4FB 修飾氨基寡核苷酸，持續(xù)4小時(shí)) ，第2和第3階段(用 S-HyNic 修飾抗體，然后偶聯(lián)物形成和純化，持續(xù)6.5小時(shí))在第2天。不建議在第二階段之后停止該程序。從4FB 標(biāo)記的寡核苷酸開始大大減少了完成過(guò)程的總時(shí)間。用 S-4FB1修飾氨基寡核苷酸如果從4FB 修飾的寡核苷酸開始，直接進(jìn)入階段2。輸入氨基寡核苷酸細(xì)節(jié)到抗體-寡核苷酸結(jié)合計(jì)算器直接從寡核苷酸供應(yīng)商的分析證書進(jìn)入抗體-寡核苷酸結(jié)合計(jì)算器.a)寡核苷酸名稱) OD260單位供應(yīng)商提供的 A 部分)寡核苷酸摩爾消光系數(shù)(公升 mol-1cm-1) d)寡核苷酸分子量(道爾頓) e)每 OD260納摩爾產(chǎn)品數(shù)據(jù)表中列出

重懸浮氨基寡聚體1。確保至少15 OD260單位的寡核苷酸可用于修改。2。將裝有凍干寡核苷酸的小瓶以15,000 x g 的速度離心15秒，使凍干物質(zhì)在試管底部沉淀。3。如果試管中含有15-25 OD260單位的寡核苷酸，向試管中加入50μl 的寡核苷酸再懸浮液。如果試管中含有超過(guò)25OD260單位的寡核苷酸，加入足夠體積的寡核苷酸重懸浮溶液以產(chǎn)生0.5 OD260/μl 的溶液(例如，如果有31OD260單位的寡核苷酸，加入62μl 的寡核苷酸重懸浮溶液)。讓小球重新水合1分鐘，然后以中速輕輕旋轉(zhuǎn)溶液10秒，以幫助溶解。重復(fù)這個(gè)過(guò)程，直到?jīng)]有未溶解的凍干殘留物。測(cè)量低聚物濃度低聚物濃度可以使用微容量紫外-可見分光光譜儀(例如 NanoDropTM)或傳統(tǒng)的紫外-可見分光光度計(jì)來(lái)測(cè)量。按照下面的說(shuō)明可用的儀器類型。用納米滴定法測(cè)定低聚物濃度: 1。在微量離心管中，將2.0 μl 低聚物溶液轉(zhuǎn)移到398μl 超純水中，制備1:200稀釋液。攪拌均勻。2。選擇納米滴上的“核酸"模塊，用超純水初始化儀器。3。清洗樣品臺(tái)座，用2μl 超純水沖洗。測(cè)量1:200寡核苷酸溶液的260nm 吸光度，如在10mm 光程窗口中顯示的那樣。5。將 A260值除以5，計(jì)算出庫(kù)存寡聚溶液的 OD260/μl 濃度。

用常規(guī)UV-Vis測(cè)定寡聚物濃度

分光光度計(jì)：

1.在微量離心管中，通過(guò)轉(zhuǎn)移制備1:500稀釋液 將2.0μl低聚溶液加入998μl超純水中。通過(guò)以下方式充分混合渦流。2.使用1cm路徑長(zhǎng)度的石英比色皿，空白分光光度計(jì)  在260nm下使用超純水。3.測(cè)量1:500寡聚物溶液的260nm吸光度。4.將該數(shù)字除以2，計(jì)算儲(chǔ)備低聚溶液。OD260/μl氨基寡聚物濃度通過(guò)方法，將該值乘以50μl，以確定低聚體可用于修飾。如果可用的OD260單元少于15個(gè)，在繼續(xù)之前獲得額外的寡聚物。D、 緩沖液交換氨基寡聚物1.擰松瓶蓋半圈，準(zhǔn)備一個(gè)紅色瓶蓋旋轉(zhuǎn)柱，擰下底部封口，并將其放入2毫升的空容器中收集管。2.使用實(shí)驗(yàn)室標(biāo)記，在柱的外側(cè)放置一條垂直線。確保該線朝外（遠(yuǎn)離轉(zhuǎn)子中心）在該步驟和所有后續(xù)步驟中。3.以1500 x g離心柱1分鐘以除去儲(chǔ)存物緩沖器重要提示：確保離心機(jī)設(shè)置為“g"或RCF，而不是RPM在所有離心步驟中。4.從收集管上取下柱（丟棄收集含有過(guò)量緩沖液的管），并將柱置于新的2ml中收集管。5.緩慢小心地將50μl寡聚物溶液移入樹脂床的中心。小心不要讓低聚溶液接觸管壁；它必須向下通過(guò)樹脂本身。6.更換蓋子并松開半圈。7.以1500 x g離心柱2分鐘，以回收脫鹽的寡聚物進(jìn)入收集管。8.將此溶液轉(zhuǎn)移到新的微量離心管中并測(cè)量μL微量移液管。9.將回收的脫鹽低聚體的體積（μl）輸入抗體–寡核苷酸結(jié)合計(jì)算器。10.輕輕渦旋低聚溶液，使其充分混合。11.重復(fù)上述C節(jié)所述的濃度測(cè)量。12.將計(jì)算的ODc/μl低聚原液濃度輸入抗體-寡核苷酸結(jié)合計(jì)算器。注：過(guò)量的不合格寡聚物可無(wú)限期儲(chǔ)存在以下-20°C。E、 溶解S-4FB1.以15000 x g的速度短暫離心S-4FB試劑，以確保所有材料在管子的底部。2.向S-4FB中加入40μl無(wú)水DMF并渦旋20秒重新懸浮。6737 Mowry Avenue我們一起突破™用戶指南接第2頁(yè)。第3頁(yè)3.繼續(xù)周期性渦旋，直到顆粒全溶解?？赡苄枰舷挛茦悠穾状巍?/span>4.將全溶解的試劑快速旋轉(zhuǎn)至試管底部。F、 用S-4FB修飾氨基寡聚體使用A節(jié)和B節(jié)中輸入的信息寡核苷酸結(jié)合計(jì)算器將確定體積將無(wú)水DMF和S-4FB在無(wú)水DMF中加入脫鹽的氨基低聚溶液。這些卷可在C節(jié)中找到抗體-寡核苷酸結(jié)合計(jì)算器。1.向低聚溶液中加入定體積（μl）無(wú)水DMF并短暫渦旋混合。2.將溶解在無(wú)水DMF中的定體積的S-4FB添加至寡聚物和漩渦混合。不要離心反應(yīng)混合物加入S-4FB試劑后。3.在室溫下孵育2小時(shí)，使S-4FB反應(yīng)與氨基寡聚物。4.以15000 x g離心管2分鐘，以沉淀任何不溶物反應(yīng)副產(chǎn)物。在以下G部分中，僅使用澄清上清液（其含有4FB寡聚物）。G、 去除多余的S-4FB1.在4FB寡聚修飾反應(yīng)結(jié)束前5分鐘，通過(guò)將每個(gè)瓶蓋擰松一半，準(zhǔn)備兩個(gè)棕色瓶蓋旋轉(zhuǎn)柱旋轉(zhuǎn)，擰下每個(gè)底部封口，并將每個(gè)柱放置在空的2ml收集管。2.使用實(shí)驗(yàn)室標(biāo)記，在每列的外側(cè)放置一條垂直線。確保該線朝外（遠(yuǎn)離轉(zhuǎn)子中心）在該步驟和所有后續(xù)步驟中。3.以1500 x g離心柱1分鐘以去除儲(chǔ)存緩沖器重要提示：確保離心機(jī)設(shè)置為“g"或RCF，而不是RPM在所有離心步驟中。4.從收集管上取下柱（丟棄收集含有過(guò)量緩沖液的試管），并將柱放入新的2ml中收集管。5.緩慢小心地用移液管將整個(gè)低聚修飾反應(yīng)移入只有一列的中心。小心不要讓寡聚溶液接觸柱壁；它必須向下通過(guò)樹脂本身。6.更換蓋子并松開半圈。保持另一列打開在下一步中，將工作臺(tái)頂部（不要將其用作平衡管）。 

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