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簡介由 bruce ames 博士和其他人在1970年代早期命名和開發(fā)，標(biāo)準(zhǔn)的“ ames 檢測"是常用的安全評估和監(jiān)管提交的檢測方法之一。這種細(xì)菌反向突變試驗(yàn)的目的是通過測量一種化學(xué)品在幾個細(xì)菌菌株的選定位點(diǎn)誘發(fā)反向突變的能力來評估其遺傳毒性。它對多種誘變和致癌化學(xué)物質(zhì)(1,2,3)敏感。這項(xiàng)簡單、快速及廉價的測試，是多種產(chǎn)品(包括藥物、醫(yī)療儀器、食物添加劑、工業(yè)化學(xué)品及除害劑)安全測試所需的基因毒性測試方法之一。
“ ames 試驗(yàn)"通過使用五個或更多的測試菌株來測量 dna 單堿基水平的遺傳損傷?；?yàn)中使用的鼠傷寒沙門氏菌和大腸桿菌菌株都有一個*的突變，這個突變阻斷了沙門氏菌或色氨酸生物合成的大腸桿菌中組氨酸的合成(4,5)。由于這些原始突變，細(xì)菌需要外源性組氨酸或色氨酸才能生存，如果沒有這些必需營養(yǎng)素(營養(yǎng)缺陷) ，細(xì)菌就會餓死。檢測的關(guān)鍵是細(xì)菌經(jīng)歷了一次補(bǔ)償性突變，使基本基因重新開啟(逆轉(zhuǎn)) ，允許細(xì)胞在缺少組氨酸或色氨酸(原生營養(yǎng)物質(zhì))的情況下生長。每個菌株都是通過一種特定類型的突變產(chǎn)生的——要么是堿基對替換，要么是位移突變。由于反向、補(bǔ)償性突變通常必須通過相同的誘變機(jī)制發(fā)生，機(jī)械毒理學(xué)信息也可以從 ames 試驗(yàn)結(jié)果中獲得，該試驗(yàn)結(jié)果基于菌株的反向突變模式。
化學(xué)物質(zhì)可以是直接作用的誘變劑，也可以通過代謝轉(zhuǎn)化為誘變的形式。因此，包括amesassay在內(nèi)的體外遺傳毒理學(xué)分析都是在存在和不存在外源性代謝激活系統(tǒng)的情況下進(jìn)行的。代謝激活系統(tǒng)包括大鼠肝臟勻漿(s9)和輔助因子的微粒體部分。在使用aroclor 1254 (aroclor)和苯甲酰黃酮混合物(pb bnf)加工前，誘導(dǎo)大鼠肝臟中的酶水平。標(biāo)準(zhǔn)Ames試驗(yàn)設(shè)計包括初步毒性試驗(yàn)或混合毒性和突變試驗(yàn)，然后是確定的突變試驗(yàn)。在毒性和突變試驗(yàn)中，試驗(yàn)菌株與s9混合物(在s9激活條件下)或緩沖液(在非激活條件下)、試驗(yàn)品或?qū)φ掌?、微量組氨酸或色氨酸和熔融瓊脂相結(jié)合。
這種細(xì)菌利用微量的組氨酸或色氨酸進(jìn)行幾次細(xì)胞分裂，但一旦用完就會停止生長，留下一個典型的“背景草坪"，隨著毒性的增加密度減小。48小時后，只有那些經(jīng)歷了逆向突變，重新啟動必需基因的細(xì)胞，存活了下來，形成了突變菌落。計算背景草坪密度，然后計算復(fù)活菌落的數(shù)量。經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織(經(jīng)合組織)是一個政府間組織，致力于協(xié)助各國政府，為經(jīng)濟(jì)、社會和治理方面的挑戰(zhàn)提供指導(dǎo)。經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織建立了化學(xué)試驗(yàn)的指導(dǎo)方針，來評估化學(xué)試劑的安全性，包括藥品。1997年，根據(jù)經(jīng)合組織化學(xué)品檢測指南，采用了 test 471: bacterial reverse mutation test。這個測試被推薦為基因毒性活性的初步篩選，特別是點(diǎn)突變誘導(dǎo)活性的篩選。點(diǎn)突變是許多人類遺傳性疾病的原因，有大量證據(jù)表明點(diǎn)突變與人類和動物的腫瘤形成有關(guān)。(6)
需要 glp 基因毒性測試才能提交監(jiān)管申請的藥物和化學(xué)品的開發(fā)數(shù)量每年都在增加。同時，在產(chǎn)品開發(fā)的早期使用非 glp 遺傳毒性測試來篩選候選人/補(bǔ)償以便進(jìn)一步開發(fā)的做法也在增加。成功的基因毒理學(xué)篩選測試需要能夠預(yù)測全部 glp 研究的結(jié)果，這些研究最終將為規(guī)范提交而運(yùn)行，保存測試物品，價格低廉，并且能夠快速運(yùn)行。為了滿足這一不斷擴(kuò)大的市場需求，開發(fā)了 ames iiTM 檢測方法。生物依賴性是提供這一重要檢測方法的*位置。生物依賴專用性保持并已成為來自 bruce ames 的原始 ames 細(xì)菌株和在 bruceames 博士實(shí)驗(yàn)室開發(fā)的 ames ii 菌株(最初由 xenometrix 商業(yè)化)的正式分配點(diǎn)。Ames ii 技術(shù)由 bioreliance 在全球范圍內(nèi)授權(quán)，并在北美銷售，包括特定服務(wù)和成套設(shè)備。
該方法的原理是作為遺傳毒性篩選方法的第二代細(xì)菌反向突變法。這種檢測方法是對傳統(tǒng)的“ amesassay"方法的改進(jìn)，由 bruce ames 博士在加州大學(xué)伯克利分校的實(shí)驗(yàn)室開發(fā)。傳統(tǒng)的 ames 試驗(yàn)已經(jīng)被修改，以允許該試驗(yàn)作為一種高通量篩選試驗(yàn)，需要非常少量的試驗(yàn)品。該方法是通過細(xì)胞生長來檢測多個微孔中是否存在突變體。 ames ii 方法可以同時檢測移碼突變和外源(s9)代謝激活條件下的堿基對替換。用傳統(tǒng)的 ta98沙門氏菌株檢測到移碼突變。利用6株鼠傷寒沙門氏菌特異性工程菌檢測不同類型的堿基配對。每個菌株在組氨酸操縱子上都有一個不同的錯義突變，這個操縱子被設(shè)計成能夠*地還原為6種可能的堿基替換組合中的一種，這些堿基替換組合會引起堿基序列的轉(zhuǎn)換或顛換。這六種菌株組合成一種單細(xì)胞培養(yǎng)物，叫做 tamix。與標(biāo)準(zhǔn)的沙門氏菌測試菌株相比，tamix 菌株具有較低的自發(fā)回復(fù)頻率，這使得利用微量平板波動格式變得更加容易。兩個菌株被鍍成一式三份的384孔板。如果指示劑介質(zhì)經(jīng)歷了從紫色到黃色的變化，或者在井中清楚地看到一個菌落，那么這些水井就被確定為回復(fù)劑
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